《組織透明化－使整個生物樣本變得透明》

組織本身是不透明的，因此光線在穿過碳水化合物、蛋白質、脂質和其他色素分子等不同成分時會發生散射。組織透明化透過使整個組織透明化來解決這個問題。這使得科學家能夠看到整個樣本的結構和相互作用，而不僅僅是一小片樣本。

傳統上，科學家會將組織切成薄片，以便在顯微鏡下進行研究。然而，這種方法可能會損壞精細的結構並扭曲細胞的自然 3D 排列，導致組織形態的 3D 構建不準確。組織透明化允許研究人員對整個組織進行完整成像，從而避免了這些問題。

組織透明化方案的多樣性反映了適應特定應用（物種、組織類型）和所需染料（螢光蛋白、抗體標記）的需要。由於每個方案對樣品製備和程序都有特定的要求，因此選擇正確的方案可能是一項複雜而艱鉅的任務。為了簡化這個決策過程，我們將組織透明化方法分為三大類：

1.有機溶劑形式的組織透明化

大多數有機溶劑透明化程序都有一個簡單的三步驟機制：

脫水：使用乙醇或乙醚去除組織水分。

脫脂：用有機溶劑去除脂質。

折射率 (RI) 匹配：建立均勻的折射率以實現透明度。

有機溶劑清除快速、高效、廉價。它可以產生高度透明的樣品，是腫瘤、成人組織或高度髓鞘化大腦等緻密組織的理想選擇。例如: iDISCO、uDISCO、3DISCO、BABB 方法和 MACS® Clearing Kit。

 2.水基（親水性）組織透明化

此類別涵蓋多種利用水溶性分子進行透明化和折射率 (RI) 匹配的方案。其中一種方式是在碳水化合物溶液（例如 Scale、CUBIC）中進行 RI 匹配之前使用不同洗滌劑濃度和超水合溶液的延長孵育過程對組織進行脫脂。與在蔗糖或FRUIT等純碳水化合物溶液中孵育相比，這種組合的去污劑和超水合方法在脫脂和組織清潔方面要有效得多。脫脂過程引起的過度水合作用也會導致組織腫脹。這種腫脹可能是一把雙面刃：它會使組織變軟且容易受損，但它也有利於擴張組織的成像。

3.水凝膠包埋

水凝膠嵌入用於在脫脂過程中保持組織完整性，也可以使用儀器加速脫脂。水凝膠方案與內源性螢光蛋白和抗體相容。然而，這種方法有缺點。初始設備投資可能很昂貴，而且執行該技術對於初學者來說極具有挑戰性。

【有機溶劑型組織清潔效果最佳試劑-MACS® Clearing Kit】

MACS® Clearing Kit能夠對不同組織進行免疫染色和清除，以進行後續的三維 (3D) 成像分析。使用 MACS® Clearing Kit 開發了特定方案，可輕鬆、快速、有效地對不同組織（例如小鼠大腦半球、腦類器官和人類腫瘤）進行免疫染色和清除。透明化後，可以使用不同的顯微鏡系統對組織進行分析，例如光片螢光顯微鏡、共焦或雙光子顯微鏡。

MACS® Clearing Kit 提供用於不同組織的免疫染色和透明化的試劑。簡而言之，在免疫染色之前先對樣品進行固定和透化。免疫染色步驟的持續時間取決於組織。免疫染色後，使用一系列乙醇稀釋液對組織進行脫水，然後進行處理使其透明（澄清）。透明組織可在不同的顯微鏡系統中使用，例如: MACS® UltraMicroscope對透明組織進行分析。

各類組織透明化所需時間:

各類組織透明化實驗流程:

針對下面幾種組織，Miltenyi biotec 提供透明化流程建議

Mouse brain hemispheres

Mouse brain hemispheres with preservation of endogenous fluorescent protein signal

Organoids and spheroids

Organoids and spheroids (high-throughput)

Human (blood-rich) tumors and xenografts

Mouse lung/intestine

Mouse lymph nodes

Mouse spleen, kidney, and liver

Mouse embryo